면역조직화학기법 (개정4판) > Immunology

제1장 총 론
I. 서 론
11. 의학 및 생물학에 있어서의 면역조직화학의 확립과 그 의의 23
12. 면역조직화학법으로서의 효소항체법 23
13. 면역조직화학법의 종류 24
14. 형광항체법 25
II. 효소항체법의 원리
11. 표지효소의 조건 26
12. 직접법과 간접법 26
13. 직접법 및 간접법의 장점과 단점 27
14. 광학현미경과 전자현미경 관찰 28
15. 효소항체법 성공의 조건 29
제2장 효소항체법의 기본
I. 항체의 성상과 표지항체
11. 항 체 33
1) 항체의 화학구조 33
2) IgG 및 IgG 분획(fraction)의 분리와 정제 33
3) 단세포군항체와 다세포군항체 34
12. 효소표지법 34
13. 항체 표지에 사용되는 효소 36
II. 항체의 취급방법과 사용시의 주의점
11. 항체의 문제 37
1) 항체의 역가(antibody titer) 37
2) 로트의 차이 37
3) 불순항체가 섞여 있는 경우(주로 항혈청의 경우) 37
4) Region specificity(항호르몬항체의 경우) 39
5) 합텐항체의 주의점 40
6) RIA용 항체의 주의점 41
7) 동물항원에 대한 항체 41
8) 항체의 검증 42
9) 항원항체반응에 사용하는 항체의 적정농도 결정(항체의 희석법) 42
10) 항체가 전혈청인가 IgG 분획인가 44
11) 항체분자의 침투성 45
12) 항체의 보존 46
13) 항체의 적정관리 47
14) 면역염색의 품질관리 48
12. 항원의 문제 48
1) 고정으로 인한 항원성의 소실 48
2) 파라핀포매에 의한 항원성 소실 50
3) 혈장(blood plasma)단백질의 고정 및 포매에 의한 확산인공산물
(diffusion artifact) 53
4) 탈회(decalcification) 조작 및 과(過)고정의 영향 55
5) 파라핀절편에서의 항원성 부활화 56
6) 공통항원성을 나타내는 관련물질의 존재와 항원분포의 올바른 지식 56
7) 당사슬항원의 특성 63
8) 표지자의 특이성 66
9) 특정한 세포에 의한 항체의 비특이적 흡착(吸着) 66
10) 동종단백질 또는 동종효소의 동정 67
11) 생리활성과 면역반응성 67
12) 항원의 종(種)특이성 67
13) 재료의 장기보존과 항원성 68
III. 단세포군항체의 특성
11. 단세포군항체는 한 종류의 항원결정기에만 반응한다 74
12. 세포표면항원과 단세포군항체 77
13. 단세포군항체에 있어서 배양상청액(culture supernatant)과 복수의 사
용 구별 77
14. 단세포군항체의 화학적 수식과 보존 77
15. 단세포군항체에 대한 항생쥐 면역글로불린 이차항체의 선택 78
16. 단세포군항체를 사용한 면역염색의 특이성 검증 78
17. 항원결정기 78
18. 항체의 친화력(affinity)과 결합력(avidity) 80
IV. 조직과 세포의 고정
11. 조직 고정에서 주의할 점 82
12. 고정방법 82
13. 고정액의 선택 83
14. 특수한 고정액 85
15. 항원의 특성을 고려한 고정액의 선택 86
16. 고정의 실제 86
17. 고정법의 선택 88
18. 담금고정의 요령 89
19. 반응부위를 알 수 없는 항체를 검색할 때의 고정법 92
10. 신속고정법 93
11. 검체의 보존 94
12. 배양세포의 고정 95
13. 면역전자현미경용 표본의 고정 96
14. In situ hybridization법에 이용할 표본의 고정 97
15. 파라핀 표본에서 핵산 추출을 목적으로 하는 고정법 97
16. 이상적인 표본채취법 99
17. 효소항체법과 형광항체법의 비교 99
V. 절편 제작법
11. 동결절편 101
1) 동결절편의 장점 101
2) 동결절편의 종류 101
3) 동결절편의 제작 102
12. 파라핀절편 106
1) 파라핀절편의 장점과 단점 106
2) 파라핀절편의 제작 106
VI. 필요한 기구와 시약의 제작법
11. 효소항체법에 필요한 기구 109
1) 조직 적출용 기구 109
2) 고정용 기구 109
3) 포매, 박절용 기구 109
4) 염색용 기구ㆍ기기 110
5) 봉입용 기구 111
6) 항체보존용 기구 및 기기 111
7) 면역전자현미경용 기구 및 기기 111
12. 효소항체법에 필요한 고정액과 시약의 제조법 111
1) 포매제 111
2) 동결용 용매 111
3) 완충액 112
4) 고정액 112
5) 고정조직의 세정액 (동결절편용) 113
6) 내인성물질의 활성억제에 사용되는 용액 113
7) 항원성 부활화(賦活化)에 사용되는 용액 113
8) 배경 염색을 제거하기 위해 사용되는 용액 114
9) 항체 희석액 115
10) 발색 반응액 115
11) 이중염색에 사용하는 항체해리(解離)용 용액 117
12) 핵염색액 117
13) 봉입제(封入劑) 117
14) 유리슬라이드에서 조직절편의 이탈방지가공법 117
15) 면역전자현미경에 필요한 시약 118
제3장 광학현미경 효소항체법 염색의 실제
I. 표지항체법
11. 항원항체반(동결절편을 사용할 경우) 123
1) 항원항체반응용 절편 제작 123
2) 내인성 과산화효소활성의 억제 125
3) 항원항체반응을 위한 습실 제작 125
4) 항원항체반응 방법(항체액을 절편에 뿌리는 방법) 125
5) 항원항체 반응시간의 조절 127
6) 반응의 정지: 절편의 세정 128
12. 표지효소의 조직화학염색 128
1) HRP 활성 검출법 128
2) 수세(水洗) 129
13. 핵염색과 봉입 129
1) 핵염색 129
2) 탈수, 봉입 130
3) 현미경관찰 130
14. 파라핀절편을 사용한 광학현미경용 효소항체법 염색 130
1) 효소항체법 간접법의 기법 130
2) 반응 중에 절편이 박리되기 쉬운 경우의 주의점 132
3) 염색얼룩의 방지 133
4) 배경염색을 억제하는 요령 133
6) 발색제와 핵염색의 선택 134
7) Microwave 조사에 의한 항체반응시간의 단축 134
II. 고감도염색법
11. PAP법 136
1) PAP법의 염색기법 136
2) PAP법과 간접법의 비교 137
3) PAP법의 개량 137
12. ABC법과 LSAB법 138
1) BRAB법 및 LAB법 138
2) ABC법 138
3) 시판 kit를 이용한 염색 139
4) ABC법 및 LSAB법의 장점 139
5) 내인성 biotin활성 140
6) Avidin과 streptavidin의 성상 140
7) 시약의 제작법 141
8) ABC법을 이용한 이중염색 143
9) ABC법 변법 143
13. 면역 ALP기법 144
14. 효소표지 protein A 법 145
1) Protein A-과산화효소법의 염색기법 145
2) Protein A와 protein G 145
3) Protein A-HRP법의 개량법 146
15. 초고감도법 147
1) 효소표지 중합체(polymer)법 147
2) CSA법 150
16. 면역금법(금속표지항체법) 152
1) 광학현미경적 면역콜로이드(immu- nocolloid)법의 염색기법 153
2) 시약의 제작법 154
3) Immunogold silver 염색(IGSS) 154
4) 은반응(물리현상)의 실제 156
17. 그 외의 방법론 157
1) 면역 glucose oxidase 법 157
2) HRP표지 항 FITC항체를 이용하는 간접법 158
3) Hybrid 법 158
III. 효소항체법 염색시에 행하는 전처리
IV. 특수기법
V. 생쥐 조직에 생쥐 단세포군항체 이용시 고안
VI. 환자혈청을 이용한 면역염색
VII. 자동면역염색장치
VIII. 대조방법과 특이성 검증
제4장 면역전자현미경법
II. Pre-embedding법에 의한 면역전자현미경 관찰기법
III. Post-embedding 법에 의한 면역전자현미경 기법
IV. 면역전자현미경법에 있어서의 이중염색
V. 전자현미경 효소항체법을 응용한 특수관찰법
제5장 염색결과의 판정과 해석
제6장 In situ hybridization과 면역조직화학
제7장 사진촬영법과 컴퓨터 화상처리
제8장 문제점의 해결(trouble shooting)
부 록

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